Определение фракции трансферрина (CDT) (диагностика злоупотребления алкоголем)
Углеводдефицитный трансферрин – биомаркер хронического употребления алкоголя (более 60 граммов этанола в сутки).
Синонимы русские
Углеводдефицитный трансферрин (УДТ), карбогидрат-дефицитный трансферрин.
Синонимы английские
Carbohydrate-deficient transferrin (CDT), % CDT.
Метод исследования
Высокоэффективная жидкостная хроматография.
Единицы измерения
% (проценты).
Какой биоматериал можно использовать для исследования?
Венозную кровь.
Как правильно подготовиться к исследованию?
- Исключить из рациона алкоголь в течение 24 часов до исследования.
- Не принимать пищу в течение 8 часов до исследования, можно пить чистую негазированную воду.
- Полностью исключить прием лекарственных препаратов в течение 24 часов перед анализом (по согласованию с врачом).
- Исключить физическое и эмоциональное перенапряжение за 30 минут до исследования.
- Не курить в течение 30 минут до исследования.
Общая информация об исследовании
Трансферрин – сывороточный белок, главная функция которого – транспорт железа. В крови он присутствует в виде изоформ с различным количеством присоединенных остатков сиаловых кислот (в молекуле трансферрина их может быть до 8). В крови основной формой трансферрина является тетрасиалотрансферрин. При употреблении алкоголя в большом количестве гликозилирование трансферрина нарушается и в крови возрастает концентрация других его изоформ с меньшим количеством остатков сиаловых кислот (асиало-, моно-, дисиалотрансферринов). Их и оценивают как суммарный углевод-дефицитный трансферрин (CDT). Уровень карбогидрат-дефицитного трансферрина значительно возрастает при ежедневном употреблении более 60 граммов этанола (4-5 алкогольных напитков или 0,75 литра вина в день) в течение не менее двух недель. При однократном приеме высоких доз спиртных напитков концентрация углеводно-дефицитного трансферрина в крови не изменяется. Период полувыведения трансферрина составляет 2 недели, поэтому после прекращения употребления алкоголя показатель нормализуется в вышеуказанный срок.
Специфичность CDT для диагностики хронического злоупотребления спиртными напитками составляет 80-90 %, чувствительность – 60-70 %. Исследование, выполненное с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ), обладает значительным преимуществом перед иммунологическим методом в плане специфичности и чувствительности. CDT оценивается в относительных единицах ( % от общего трансферрина), поэтому наличие анемии не влияет на результат анализа.
Углеводдефицитный трансферрин – более специфичный показатель для диагностики алкоголизма, чем гамма-глютамилтранспептидаза (ГГТП) и/или средний объем эритроцитов (MCV). Однако отдельное назначение CDT (без дополнительных анализов) в качестве скрининга не рекомендовано в связи с его недостаточной чувствительностью. Необходимо также учитывать, что уровень углевод-дефицитного трансферрина повышается при врождённых нарушениях гликозилирования, галактоземии, беременности и применении гормональных препаратов.
Для чего используется исследование?
- Для диагностики хронического употребления высоких доз алкоголя;
- для оценки эффективности лечения алкоголизма;
- для мониторинга абстиненции в целях выявления рецидивов алкоголизма;
- для дифференциальной диагностики причин изменений функции печени, изменений поведения.
Когда назначается исследование?
- При подозрении на злоупотребление алкоголем;
- при наличии клинических данных и изменений в лабораторных анализах, которые могут быть ассоциированы с употреблением алкоголя (повышение ГГТП, изменение соотношения АЛТ/АСТ, нарушение функции печени, поджелудочной железы, психоневрологические изменения);
- при наблюдении за пациентами с риском рецидива алкоголизма.
Что означают результаты?
Референсные значения
Отсутствие употребления алкоголя в течение 2 недель: < 1,2 % от общего трансферрина.
Употребление алкоголя в течение 2 недель: > 2,5 % от общего трансферрина.
Причины повышения CDT:
- злоупотребление алкоголем в дозе более 60 граммов этанола в сутки в течение не менее двух недель;
- врождённые нарушения гликозилирования.
Что может влиять на результат?
- Результаты исследования могут быть искажены при беременности, приеме гормональной заместительной терапии, врождённых нарушениях гликозилирования (например, карбогидрат-дефицитном гликопротеиновом синдроме Iа типа), галактоземии, врождённом нарушении толерантности к фруктозе.
- Исследование более специфично для мужчин, чем для женщин.
- Прием лекарственных препаратов (антидепрессантов, дисульфирамов) не вызывает значительных изменений в результате данного анализа.
Важные замечания
- Уровень CDT снижается до нормы через 2 недели после прекращения употребления алкоголя. Однократные приемы высоких доз алкоголя не вызывают повышения этого показателя.
Капиллярный электрофорез
Методом, наиболее подходящим для рутинных скрининговых исследований, является метод капиллярного электрофореза в исполнении автоматических капиллярных систем Minicap и Capillarys-2 Flex Piercing.
Данный метод основан на разделении заряженных молекул в жидкой среде внутри сверхтонкого кварцевого капилляра под действием электрического тока. Белковые молекулы при этом разделяются согласно своему электрическому заряду. На разделение также оказывают влияние рН используемого буферного раствора и электроэндоосмотический поток. Метод не требует предварительной обработки образцов и позволяет осуществлять как качественную, так и количественную оценку фракций трансферрина. Расчетная формула CDT полностью соответствует текущему определению аналита (суммарное значение углевод-дефицитных фракций трансферрина), и одновременно с этим программное обеспечение прибора дает возможность производить количественную оценку каждой карбогидрат-дефицитной фракции в отдельности, что позволит использовать данные системы после утверждения международных рекомендаций по стандартизации CDT без каких-либо ограничений.
Разделение изоформ трансферрина методом капиллярного электрофореза основано на разнице их электрического заряда, величина которого прямо пропорциональна количеству остатков сиаловой кислоты. Аналитический этап на системах Minicap и Capillarys-2 Flex Piercing полностью автоматизирован и включает в себя разведение образца и его инжекцию в анодную часть капилляра. Под действием высокого напряжения изоформы трансферрина в образце, мигрируя по всей длине капилляра, разделяются на фракции, каждая из которых, достигая катодной части капилляра, последовательно регистрируется путем измерения поглощения света на длине волны 200 нм. Детекция изоформ трансферрина осуществляется в следующем порядке: асиало-, дисиало-, трисиало-, тетрасиало- и пентасиалотрансферрин. После завершения миграции капилляры немедленно промываются моющим раствором и подготавливаются к следующему анализу, заполняясь буферным раствором.
После детекции результаты обрабатываются программным обеспечением прибора и отображаются на экране монитора в виде процентного содержания фракций (количественный анализ) и денситометрической кривой (качественный анализ). Результаты качественной и количественной оценки импортируются в протокол исследования, служащий приложением к заключению о результатах анализа.